Design and validation of a protocol to assess immune resilience in dairy cows

Abstract

La resiliencia inmunitaria en vacas lecheras, definida como la capacidad del sistema inmune para enfrentar infecciones sin afectar la producción, constituye un factor determinante en la mejora de la eficiencia del sistema productivo. Con el objetivo de desarrollar un protocolo en condiciones de campo que no implique desafíos infecciosos ni comprometa la salud de la ubre o del animal, se implementó una estimulación ex vivo de sangre entera con lipopolisacárido (LPS). Para ello, se tomó sangre de cuatro vacas Holstein en lactancia media y se realizó la estimulación ex vivo dentro de tubos Vacutainer^® con cuatro concentraciones de LPS (0, 0.01, 0.1 y 1 µg/mL). Se realizó la extracción de ARNm de manera inmediata utilizando TRIzol^®. En todos los casos, se evaluó el rendimiento y pureza del ARN, y se midió la expresión génica de las siguientes citocinas IL‑6, TNF‑α, IL‑1β, IL‑10 y genes constitutivos (HPRT y ß-actina) mediante RT‑qPCR. Se obtuvo un rendimiento promedio de 300 ng/µL de ARN y una relación A260/A280 promedio de 1.99±0.01. Para analizar los efectos de la concentración de LPS sobre la expresión génica de citocinas, se realizó una cuantificación relativa tomando en cuenta también la eficiencia de los primers. Solo TNF‑α mostró un aumento significativo en su expresión en respuesta a LPS (p=0.031), cuando se separó por mínimos cuadrados, particularmente, la concentración 0.01 tendió (P=0.10) a mostrar una expresión 1.6 veces más elevada de TNF‑α que el control. En cambio, las demás citocinas evaluadas no evidenciaron cambios significativos (P>0.4). Estos resultados preliminares sugieren que el protocolo es factible y que TNF‑α podría constituir un marcador sensible para evaluar resiliencia inmunitaria ex vivo. En futuras etapas, se prevé validar este resultado en un mayor número de vacas lecheras y que las mismas se encuentren en distintas condiciones fisiológicas.