Quality of cloned bighorn sheep embryos produced by HMC from domestic sheep oocytes treated with resveratrol

Abstract

El borrego cimarrón Ovis canadensis figura en la Lista Roja de Especies en Riesgo de la UICN como de “preocupación menor”. Para coadyuvar a su conservación, la producción de embriones por transferencia nuclear de células somáticas (TNCS) permite clonar embriones a partir de células somáticas como donadoras de núcleos (carioplastos), fusionándolas con ovocitos enucleados (citoplastos) de especies domésticas homólogas o heterólogas (TNCS interespecies o TNCSI). Por otro lado, durante la maduración in vitro (MIV) de ovocitos de ovino doméstico (Ovis aries) el resveratrol favorece el desarrollo de embriones producidos por TNCS, o por fertilización in vitro. Por ello, el objetivo del presente trabajo, fue tratar ovocitos de O. aries con resveratrol durante la MIV y utilizarlos como citoplastos en la TNCSI, evaluando su efecto en la tasa de blastocistos y la calidad de los embriones clones de borrego cimarrón (O. c. mexicana). Se utilizaron fibroblastos de piel de oreja como carioplastos, de un cimarrón adulto post mortem del Zoológico de Chapultepec, congelados a -196°C durante 8 años. Las células se descongelaron y resembraron, efectuando un total de 8 pasajes celulares. A la vez, se efectuó la MIV en ovocitos de O. aries tratados con 0, 0.5 y 1.0 µM de resveratrol. Los ovocitos madurados se enuclearon manualmente para obtener citoplastos y se formaron tripletes (2 citoplastos por carioplasto), que se fusionaron eléctricamente. Los embriones clones reconstruidos se activaron químicamente y se cultivaron in vitro en medio BO-IVC-Bioscience hasta su desarrollo en blastocistos. En la MIV no hubo diferencias entre tratamientos, mientras que a 0.5 µM la tasa de blastocistos aumentó significativamente y la tasa de fragmentación disminuyó (p<0.05). Se concluye que el resveratrol favorece la tasa de blastocistos al reducir la fragmentación en embriones clones de cimarrón. Se agradece al CONAHCyT (Actual SECIHTI) por el apoyo otorgado del convenio C-459/2024.